以一年生的攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊為試材,采用不同濃度NaCl 溶液澆灌其幼苗根部,測定分析不同濃度的鹽溶液對二者生理指標(biāo)的影響,結(jié)果表明:(1) 攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊葉片中的MDA含量隨著鹽濃度的升高而增加,經(jīng)2.5%的鹽脅迫處理后,二者葉片內(nèi)丙二醛含量達(dá)最大值,與CK相比攀援衛(wèi)矛高出132%,大葉黃楊高出118%;(2) 鹽脅迫處理后,攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊葉片中脯氨酸含量變化表現(xiàn)為鹽濃度越高,積累的脯氨酸含量越多;(3) 方差分析表明,攀援衛(wèi)矛在NaCl濃度為1.5%時就表現(xiàn)出長勢衰弱,而大葉黃楊在NaCl濃度2.0%以下生長良好,2.0%以上才顯示出長勢衰弱。研究認(rèn)為,大葉黃楊的抗鹽性較攀援衛(wèi)矛更強(qiáng),鹽堿地生長的適應(yīng)范圍更廣。沭陽白蠟樹價格便宜
攀援衛(wèi)矛(Euonymus kiautshovicus Loe.),衛(wèi)矛科衛(wèi)矛屬半常綠灌木,為陽性樹種,適應(yīng)性強(qiáng),根系發(fā)達(dá),耐輕、中度鹽堿,觀賞效果好、用途廣,是良好的綠籬用樹,不僅適用于庭院、建筑物周圍,也可用于主干道綠化帶。因其對有毒氣體抗性很強(qiáng),且能吸收凈化空氣,所以是污染區(qū)理想的綠化樹種。
大葉黃楊(Euonymus japonicus Thunb.),衛(wèi)矛科衛(wèi)矛屬常綠灌木或小喬木,溫帶及亞熱帶樹種,產(chǎn)于我國中部和北部,它既喜歡在溫暖濕潤的氣候條件下生長,又耐蔭耐寒。
我國鹽堿土壤分布較廣,且還在不斷加重,如何開發(fā)利用大面積的鹽堿地已經(jīng)成為急迫的問題。目前國內(nèi)有不少使用攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊進(jìn)行鹽堿地治理和綠化改造的工程,但對其耐鹽性研究的理論不多,因此研究它們在鹽脅迫下的生長發(fā)育有著重要的科學(xué)理論意義。本試驗通過對鹽脅迫下攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊生理生化指標(biāo)的分析,旨在弄清它們生長發(fā)育的動態(tài)變化規(guī)律,找出其抗鹽能力的相關(guān)因子,建立抗鹽模型,為在鹽堿地改造和綠化苗木種植方面提供理論依據(jù)。
1 材料和方法
1.1 試驗材料
本試驗于2014年5月在榆次市苗圃溫室進(jìn)行,選用該苗圃提供的一年生攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊扦插苗為試材,于5月15日開始進(jìn)行試驗處理。
1.2 試驗設(shè)計
試驗采用單因素隨機(jī)區(qū)組設(shè)計,分別設(shè)6個處理水平,即 0.5%,1.0%,1.5%,2.0%,2.5%的NaCl鹽溶液,以澆清水作為對照(CK),每個濃度處理20盆,3次重復(fù)。每株澆灌量為500 mL,相隔10 d澆灌試驗材料的根部,共澆2次,待7月1日隨機(jī)選取各個處理及CK生長狀態(tài)基本一致的功能葉片,用清水洗凈,蒸餾水沖洗數(shù)次,再用潔凈濾紙吸凈表面水分,測定其葉片的MDA含量和脯氨酸含量。
1.3 測定MDA(硫代巴比妥酸)
根據(jù)文獻(xiàn)[7]的方法,分別稱取各品種低溫處理后的器官0.4 g加入2 mL 0.1%三氯乙酸(TCA)研磨成勻漿,再加3 mL 0.1% TCA分兩次沖洗研缽,合并提取液,放入試管中。提取液中加入5 mL 0.5%硫代巴比妥酸(TBA)溶液,搖勻。將試管放入沸水浴中煮沸10 min后,立即將試管取出放入冷水浴中冷卻,離心,取上清液并量體積。以0.5%硫代巴比妥酸溶液為空白對照,在722型分光光度計532 nm、600 nm波長處測定其吸光值。依公式計算:
MDA含量(μmol·g-1)=△A×N/155×W式中,△A為A532和A600的差;N為上清液總體積(mL);W為鮮樣品質(zhì)量(g); 155為1 μmol三甲川在532 nm的吸光系數(shù)。
1.4 測定游離脯氨酸—茚三酮比色法
根據(jù)文獻(xiàn)[8]的方法,分別稱取各品種低溫處理后的器官0.1 g加入5 mL磺基水楊酸研磨成勻漿,沸水浴浸提10 min,冷卻后裝入5 mL離心管,使用3 000 r·min-1的轉(zhuǎn)速離心10 min。取2 mL上清液加入2 mL冰醋酸和3 mL酸性茚三酮顯色液,搖勻,沸水浴40 min,冷卻至室溫;加入4 mL甲苯,充分搖勻,以萃取紅色產(chǎn)物。萃取后避光靜置。完全分層后,吸管吸取甲苯層,用722型分光光度計于520 nm波長下測定吸光度。
結(jié)果計算:游離脯氨酸含量(μg·g-1)=(C×V)/(W×A×100)式中,C為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得脯氨酸微克數(shù);V為提取液總體積(mL);A為測定時加樣量(mL);W為樣品干質(zhì)量(g)。
2 結(jié)果與分析
2.1 不同NaCl濃度脅迫對攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊葉片MDA含量的影響
由圖1可看出,經(jīng)NaCl不同濃度處理,對攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊葉片中MDA含量都有影響,表現(xiàn)為濃度越高M(jìn)DA含量越大。1.5%的NaCl處理攀援衛(wèi)矛為0.042 μmol·g-1,大葉黃楊為0.066 μmol·g-1,分別比CK增加了1.68倍、1.74倍;2.0%的攀援衛(wèi)矛為0.049 μmol·g-1,比CK增加了1.96倍;2.5%的NaCl處理對MDA含量影響最大,為CK的2.32 倍;2.0%的大葉黃楊為0.071 μmol·g-1,比CK增加了1.87倍;2.5% NaCl處理的MDA含量數(shù)值最大,為CK的2.18倍。
對不同濃度NaCl脅迫下攀援衛(wèi)矛MDA含量進(jìn)行方差分析結(jié)果如表1。方差分析顯示,攀援衛(wèi)矛在0.5%,1.0%的鹽處理下與CK相比,差異不顯著;1.5%處理差異顯著;2.0%,2.5%處理達(dá)到差異極顯著水平。由此可知,0.5%~1.0%鹽處理對攀援衛(wèi)矛葉片生物膜損傷程度較輕;而1.5%以上的NaCl處理對葉片生物膜損傷程度比較重。大葉黃楊在0.5%,1.0%,1.5%的鹽處理下與CK相比,差異不顯著;2.0%處理差異顯著;2.5%處理達(dá)到差異極顯著水平。由此可知,1.5%以下鹽處理對大葉黃楊葉片細(xì)胞內(nèi)的膜脂過氧化程度影響較輕;而1.5%以上的NaCl處理對葉片細(xì)胞內(nèi)的膜脂過氧化程度加大,生物膜損傷程度比較重。
2.2 不同NaCl濃度脅迫對攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊脯氨酸葉片含量的影響
圖2顯示,不同NaCl濃度處理對攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊脯氨酸含量都有影響,經(jīng)過處理后的葉片脯氨酸含量逐漸增高,1.5%的攀援衛(wèi)矛葉片含量為15.33 μg·g-1,比CK增加了1.25倍,2.5%的18.01 μg·g-1,為CK的1.46倍;大葉黃楊的2.0%為13.98 μg·g-1,為CK的1.39倍,2.5%的NaCl處理對MDA含量影響最大,是CK的1.50倍。
對不同濃度NaCl脅迫下攀援衛(wèi)矛葉片脯氨酸含量進(jìn)行方差分析結(jié)果見表2。方差分析顯示,攀援衛(wèi)矛在不同NaCl處理下,0.5%、1.0%與CK相比,差異不顯著;1.5%、2.0%、2.5%的NaCl處理達(dá)到差異極顯著水平。由此可知,在濃度1.0%以下鹽處理攀援衛(wèi)矛葉片可通過自身調(diào)節(jié)作用積累一定的脯氨酸質(zhì),有效降低體內(nèi)的滲透勢,維持細(xì)胞的膨壓,增強(qiáng)抗鹽能力正常生長,1.5%以上生長則受到嚴(yán)重影響。大葉黃楊在0.5%、1.0%、1.5%的鹽處理下,與CK相比差異不顯著;2.0%差異顯著;2.5%達(dá)到差異極顯著水平。由此可知,當(dāng)脅迫濃度上升時,葉片內(nèi)的游離脯氨酸含量呈逐漸上升趨勢,說明植物在鹽脅迫條件下,體內(nèi)靠積累脯氨酸來抵御逆境對它的傷害,當(dāng)濃度達(dá)到2.5%時,游離脯氨酸含量的增長超出了合理值。
3 結(jié)論與討論
(1)細(xì)胞膜是植物細(xì)胞與外界聯(lián)系的第一道防線, 它的穩(wěn)定性直接影響到植物細(xì)胞的代謝功能。研究表明: 植物受到逆境脅迫時, 膜質(zhì)過氧化加劇,大量生成MDA, 使膜透性增大[9-10]。所以通過測定MDA 含量的變化,可反映植物細(xì)胞發(fā)生膜質(zhì)過氧化的劇烈程度和植物對逆境條件反應(yīng)的強(qiáng)弱。
本試驗數(shù)據(jù)顯示,隨著NaCl濃度加大,攀援衛(wèi)矛葉片中MDA含量逐漸升高,經(jīng)方差分析可知,1.5%濃度的NaCl處理差異顯著;2.0%、2.5%的NaCl處理達(dá)到差異極顯著水平。說明1.5% 以下鹽濃度處理對攀援衛(wèi)矛葉片生物膜基本沒有損傷;而1.5%以上的處理對葉片生物膜則有較強(qiáng)傷害。大葉黃楊在濃度為2.0%的鹽溶液處理下差異顯著;2.5%的NaCl處理達(dá)到差異極顯著水平。表明2.0% 以下鹽處理對大葉黃楊葉片細(xì)胞內(nèi)的膜脂過氧化有輕度損傷;而2.0%以上的NaCl處理對葉片細(xì)胞內(nèi)的膜脂過氧化程度加大,生物膜損傷程度嚴(yán)重。
(2)脯氨酸是植物高蛋白組分之一,起滲透調(diào)節(jié)作用,游離狀態(tài)存在于植物體中,在正常環(huán)境條件下,植物體內(nèi)游離脯氨酸含量很低,而植物遇到逆境脅迫時,植物體內(nèi)游離脯氨酸含量增加可以保護(hù)細(xì)胞質(zhì)內(nèi)許多酶免受傷害,這是植物一種很有效的自我保護(hù)機(jī)制[13-14]。
由試驗結(jié)果可知,經(jīng)1.0%以下鹽濃度處理,攀援衛(wèi)矛通過自身調(diào)節(jié)作用積累一定的脯氨酸,有效降低了體內(nèi)的滲透勢,維持細(xì)胞的膨壓,增強(qiáng)抗鹽能力,1.5%以上處理生長變衰;大葉黃楊在1.5%以下的鹽處理能正常生長;2.0%處理則生長受到影響,當(dāng)2.5%的NaCl處理時,游離脯氨酸含量達(dá)到最大值,生長受到抑制。可見,攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊在鹽脅迫時有一定的自我調(diào)節(jié)能力。
本試驗在不同濃度鹽脅迫下, 測定了攀援衛(wèi)矛和大葉黃楊葉片中的MDA含量和脯氨酸含量,發(fā)現(xiàn)大葉黃楊在2.0%以下濃度脅迫生長良好,2.0%以上顯示出長勢衰弱;而攀援衛(wèi)矛則在1.5%濃度時就表現(xiàn)出長勢衰弱,所以認(rèn)為大葉黃楊在鹽堿地生長的適應(yīng)范圍比攀援衛(wèi)矛更廣,抗鹽性更強(qiáng)。
大葉黃楊球價格表常用規(guī)格
苗木名稱 | 高度(cm) | 冠幅(cm) | 單價 |
衛(wèi)矛苗 | 35~45 | - | 0.45~0.65 |
衛(wèi)矛苗
| 55~70 | - | 0.68~0.9
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衛(wèi)矛球
| - | 50 | 8~11 |
衛(wèi)矛球
| - | 60 | 10~12 |
衛(wèi)矛球
| - | 80 | 28~30 |
衛(wèi)矛球
| - | 100 | 48~55 |
衛(wèi)矛球
| - | 120 | 65~75 |
衛(wèi)矛球
| - | 150 | 100~115 |
衛(wèi)矛球
| - | 180 | 280~300
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